企业展示

    首页
    　—　企业展示
    　—　有济说

    有济说 | TLR7/8免疫激动剂的临床前抗肿瘤药效评价

    一、TLR受体家族简介


    Toll样受体（TLRs）是一类广泛表达在天然免疫系统的Ⅰ型跨膜糖蛋白，通过识别保守的病原体相关分子模式(PAMPs)，成为机体抵抗感染性疾病的第一道屏障。TLRs家族有多个成员，包括TLR1、TLR4、TLR5，能够参与识别细菌、真菌和某些病毒的组成成分；TLR3、TLR7、TLR8能识别核酸类分子，如病毒的RNA和DNA。在免疫治疗领域，TLR7/8激动剂以其独特的作用机制和显著的抗肿瘤效果成为研究的热点。

    image.png
    图1:Toll家族作用机制图

    二、TLR7/8激动剂的作用机制及药物研发现状


    TLR7/8位于内涵体膜上，TLR7/8激动剂与TLR7或TLR8结合，形成同源二聚体，可以诱导MyD88或TRIF依赖的信号通路，激活NF-κB，促进细胞因子和趋化因子分泌，激活先天免疫反应和获得性免疫反应。TLR7/8激动剂在肿瘤治疗、病毒感染性疾病、自身免疫性疾病中，通过病原体的分子模式，激活免疫系统，发挥抗肿瘤及免疫调节等作用。

    目前全球仅上市一款TLR7激动剂类药物咪喹莫特（Imiquimod），该药主要用于皮肤基底细胞癌、光化性角化病及HPV相关疣状病变的治疗。除此之外，还有几款TLR7、TLR8以及TLR7/8双激动剂进展较快，正处于临床阶段。
    表1.jpg
    表1:已上市及临床阶段的TLR7/8激动剂药物

    TLR7/8激动剂作为免疫治疗领域的重要靶点，尽管在肿瘤、抗病毒和疫苗佐剂等领域展现出潜力，但其在临床应用上仍面临多重挑战，如引发全身免疫过度激活导致细胞因子风暴、实体瘤免疫细胞浸润不足、单药疗效有限等，所以为降低药物的临床使用风险，通过临床前药效学研究对TLR7/8激动剂的抗肿瘤活性、免疫调节功能以及安全性进行全面评估是十分必要的。本文将基于赢多多在TLR7/8激动剂领域的研究经验，结合案例对其体外和体内相关作用机制和药效学评价的研究策略进行分享。

    三、TLR7/8激动剂的临床前药效评价


    （一）体外药效机制研究

    1. 配体-受体结合能力研究

    配体-受体结合能力研究是药效机制的核心基�。┪锇邢蛐�、效价强度、结构优化及安全性提供不可替代的实验依据。赢多多药效平台构建了能够稳定表达不同种属（人、猴、犬、大鼠、小鼠）TLR7/8的HEK293细胞，并且将NF-κB特异性的荧光素酶稳定转入到HEK293细胞，通过荧光素酶的活性情况来评价药物对TLR7/8的结合及激活能力，同时也为后续毒理学评价的种属选择提供依据。

    如以下案例所示，在表达人及食蟹猴TLR8 NF-κB-luciferase的HEK293细胞中，TLR7/8激动剂R848（Resiquimod）在不同剂量下，都能够激活人及食蟹猴TLR8细胞，并呈剂量依赖性。

    image.png
    图2:TLR7/8激动剂刺激人、食蟹猴TLR8 NF-κB-luciferase的HEK293报告细胞情况

    2.免疫激活评价研究

    根据目前研究显示，TLR7、8能够在多种免疫细胞中表达，如外周血单个核细胞（PBMC）、树突（DC）细胞、巨噬细胞、B细胞和单核细胞等，可以通过研究TLR7/8激动剂对特定免疫细胞的激活情况，深入分析其作用机制。在体外构建PBMC、DC细胞和巨噬细胞（单核细胞诱导分化技术）激活研究平台，以评价TLR7/8激动剂激活免疫细胞的机制。

    （1）PBMC的免疫激活评价

    TLR7/8激动剂激活PBMC中的免疫细胞能够诱导包括促炎细胞因子（如TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-23等）和抗病毒细胞因子（如IFN-α、IFN-γ等）等多种细胞因子的释放，这些细胞因子在激活先天免疫反应和介导获得性免疫反应中发挥着关键作用。
    在体外评价PBMC的免疫激活研究中，主要考量如下：

    ①种属选择：选择不同种属（如人、食蟹猴、比格犬、大鼠、小鼠）开展PBMC刺激试验，能更好的反馈激动剂对免疫细胞的激活情况；同时多个种属PBMC免疫激活的分析，也能够为后续毒理学研究中的种属选择提供依据；

    ②供体选择：由于供体的遗传背景、细胞亚群及功能状态等存在差异，导致细胞因子分泌水平和免疫细胞激活状态的不同，在供体选择上建议同种属的PBMC细胞选择不同来源的个体；

    ③检测指标：通过分析细胞上清中的细胞因子水平和细胞表面Marker水平来直观反应免疫细胞的激活情况。

    案例展示：

    image.png
    图3:TLR7/8激动剂刺激人PBMC分泌细胞因子情况

    在案例中，我们使用TLR7/8激动剂诱导人源PBMC分泌一系列关键细胞因子，包括IFN-α、TNF-α和IL-6。这些细胞因子的分泌水平在一定范围内上升，直观地反映了免疫细胞的激活状态，并呈现出明显的浓度依赖性。

    （2）树突状（DC）细胞和巨噬细胞的免疫激活评价

    在体外评价DC和巨噬细胞的免疫激活情况研究中，主要考量如下：

    ①种属选择：选择人源细胞，为药物开发提供直接试验依据；

    ②供体选择：因为不同个体的免疫细胞对TLR7/8激动剂的敏感程度存在差异，建议尝试不同供体测试免疫细胞的激活情况；

    ③检测指标：重点关注细胞上清中的细胞因子水平，能够直接反映DC细胞和巨噬细胞的激活状态。通过直接检测这些细胞因子的分泌水平，可以科学、精准地评估TLR7/8激动剂对免疫细胞的激活效果。

    案例展示：

    image.png
    图4:TLR7/8激动剂刺激树突及巨噬细胞分泌IL-12的情况

    在案例中，我们使用了Telratolimod激活DC细胞和巨噬细胞，通过检测细胞上清中的细胞因子水平来监测免疫细胞的激活情况。结果显示，随着药物浓度的逐渐提高，DC细胞和巨噬细胞分泌IL-12因子的水平明显上升。DC细胞和巨噬细胞被成功激活，且呈现剂量依赖。

    （二）体内抗肿瘤药效评价

    TLR7/8免疫激动剂在体内动物模型中的抗肿瘤评价主要关注动物品系选择和评价指标的设置。

    1.动物品系选择：因为主要是研究药物对体内免疫细胞的激活情况，所以在选择动物品系时需要选择免疫健全的动物。

    2.评价指标选择：药物疗效方面，可以通过测量肿瘤体积和监测动物体重变化来评价药物对肿瘤的抑制效果及毒性；体内机制方面，可以对免疫细胞浸润、细胞因子水平进行考察。

    案例展示：

    image.png
    图5:TLR7/8免疫激动剂体内抗肿瘤研究

    image.png
    图6:TLR7/8免疫激动剂在皮下移植瘤模型中肿瘤组织中细胞因子及免疫浸润研究

    在本案例中，采用高、中、低三种不同剂量的TLR7/8激动剂，对小鼠皮下移植瘤模型进行了体内抗肿瘤作用的研究。结果显示，与模型对照组相比，各剂量组小鼠的肿瘤体积显著减�。⒊氏殖黾亮�-效应关系，表明该激动剂具有良好的抗肿瘤效果。

    此外，进一步分析了剂量组肿瘤组织中细胞因子水平及免疫细胞浸润情况。研究发现，剂量组小鼠肿瘤组织中的细胞因子水平显著高于模型对照组，同时CD4+T细胞、CD8+T细胞、树突状细胞（DC）以及巨噬细胞（Macrophages）的比例也明显增加。上述结果表明，TLR7/8激动剂能够有效激活T细胞、树突状细胞和巨噬细胞，从而增强机体的抗肿瘤免疫反应

    结语

    在疾病治疗的前沿探索中，TLR7/8激动剂正以其独特的优势成为焦点。其精准靶向免疫系统的关键受体，激活天然免疫反应，犹如为机体免疫应答按下“加速键”。临床前药效研究通过体外试验、动物模型等技术评估药物的靶点激活与有效性，为临床试验奠定基�。铀僖┪锏淖τ�。赢多多已经建立了完善的TLR7/8激动剂临床前药效学评价体系，能够针对TLR7/8靶点药物提供个性化技术服务，助力TLR7/8免疫激动剂的加速研发，开启免疫治疗新时代。

    会员登录

    返回顶部
    注册
    ╳

    姓名*

    公司名称*

    邮箱*

    电话号码*

    验证码* 获取验证码

    您想咨询的业务*

    登录
    ╳

    电话号码*

    验证码* 获取验证码

    注册账号

    完善信息
    ╳

    公司名称*

    姓名*

    邮箱*

    您想咨询的业务*

    ╳
    注册须知

    注册账号

    部分本平台服务仅向注册用户提供，如果您使用本平台提供的网络存储空间进行视听、文字等内容的上传及传播等，请先根据本协议及其他本平台规则提示的规则、流程注册成为注册用户，并确保注册信息的真实性、正确性及完整性，如果上述注册信息发生变化，您应及时更改。

    您应对注册获得的本平台账号（以下简称“账号”）项下的一切行为承担全部责任，不得侵犯包括但不限于本平台在内的任何主体的合法权益。

    您理解并同意，您仅享有账号及账号项下由本平台提供的虚拟产品及服务的使用权，账号及该等虚拟产品及服务的所有权归本平台所有（法律法规另有规定的除外）。未经本平台书面同意，您不得以任何形式处置账号的使用权（包括但不限于赠与、出借、转让、销售、抵押、继承、许可他人使用）。如果本平台发现或者有合理理由认为使用者并非账号初始注册人，本平台有权在不通知您的情况下，暂停或终止向该注册账号提供服务，并注销该账号。

    您应妥善保管账号信息、账号密码以及其他与账号相关的信息、资料。如因您的原因，造成账号信息、资料、数据的变动、灭失或财产损失等，您应立即通知本平台并自行承担相关法律后果。



    本平台上的内容

    本平台上的内容是指经由本平台提供的服务，以上传、张贴或任何其他方式传送或传播的任何资讯、资料、文字、软件、音乐、音频、照片、图形、视频、信息、链接或其他资料，无论系公开还是私下传送（以下简称“内容”），内容提供者、上传者应对其提供、上传的内容承担全部责任，如果给本平台造成损失的，还应向本平台承担赔偿责任。对于第三方因用户上传的内容向本平台主张权利的，本平台有权在不事先通知内容提供者、上传者的情况下直接采取删除、屏蔽、断开链接等必要措施。

    您在本平台上传或发布的内容，您保证对其享有合法的著作权或相应授权，本平台有权展示、散布及推广前述内容。

    为提高您内容曝光量及发布效率，本平台将额外为您提供全球范围内的展示和推广服务，您同意您在本平台的账号所发布的全部内容均授权本平台以您的账号同步至本平台运营的全部产品，包括但不限于PC、平板、手机、电视、机顶盒、可穿戴设备等全部客户端软件和/或网站。同时，您允许本平台在同步并展示内容时可自行或委托第三方进行必要的处理（包括但不限于翻译、汇编、改编等）。您在此确认并同意，本平台有权自行或委托第三方在与上述内容、本平台产品及相关服务、本平台和/或本平台品牌有关的任何宣传、推广和/或研究中以适当的方式开发和使用上述内容（全部或部分）。